中性粒细胞CD64指数对新生儿吸入性肺炎的诊断价值

李 娟,石青峰△,李春亮,银娜秋,杨益锋,黄超宇,张雪琳,蒋文钦,黄嘉锦,贺际芸

1.广西壮族自治区桂林市人民医院检验科,广西桂林 541002;2.广西壮族自治区桂林市人民医院新生儿科,广西桂林 541002;3.广西壮族自治区南溪山医院检验科,广西桂林 541002

新生儿吸入性肺炎是导致新生儿呼吸困难的常见疾病之一。新生儿吸入性肺炎主要指吸入物如羊水、胎粪、乳汁等进入新生儿呼吸道后导致气道完全堵塞或部分阻塞,诱发肺泡扩张组织、肺泡萎缩,从而刺激肺部产生的炎症反应[1]。新生儿吸入异物后临床症状早期不明显,但感染进展迅猛,前期主要为哭闹、皮肤青紫、呛奶等表现,后期治疗延迟将会诱发呼吸困难、气促等,并发症发生率高,且具有致死风险[2]。因此早期诊断新生儿是否存在吸入性肺炎,对临床治疗及预后判断具有重要意义[3]。临床上反映感染的传统炎症指标物有白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分率(N%),超敏C反应蛋白(hs-CRP)及红细胞沉降率(ESR)[4],以及近几年出现的白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)、血清淀粉样蛋白A(SAA)等,这些指标对新生儿早期感染的诊断特异度较低,存在一定的局限性。而提示感染的“金标准”——细菌培养,存在培养阳性率低,耗时长,影响因素较多,对早期感染的诊断同样具局限[5]。另外,胸部X线片检查也对肺部感染的临床诊断有价值[6],但该检查具有辐射性,尤其对新生儿来说,存在风险和限制。因此,寻找一种对新生儿吸入性肺炎诊断灵敏度和特异度高的早期炎症指标十分有意义。近年来有文献报道用流式细胞术检测中性粒细胞CD64(nCD64)对细菌感染具有较高的早期诊断价值[7]。文福生等[8]研究发现,CD64联合多项炎症指标检测可提高小儿细菌性肺炎的诊断,且CD64在老年人和新生儿中的表达高于成年人,在孕妇中的表达高于未怀孕者。李迎敏等[9]研究发现,nCD64指数、血清PCT及IL-6水平与新生儿感染性肺炎病情严重程度密切相关。而目前nCD64指数在新生儿吸入性肺炎感染的早期诊断少见报道。本研究通过分析85例新生儿吸入性肺炎患儿的nCD6指数检测结果,并将nCD64指数、WBC、N%、hs-CRP诊断新生儿吸入性肺炎的效能进行比较,结合相关文献,探讨nCD64指数对新生儿吸入性肺炎早期诊断的价值。现报道如下。

1.1一般资料 回顾性选取桂林市人民医院2021年7月到2022年7月收治的生产过程中吸入胎粪或羊水的105例新生儿(年龄≤28 d)为研究对象。新生儿胎龄32+2～41周,出生体质量1 240～4 080 g,男47例(44.8%)、女58例(55.2%)。根据临床诊断结果分为吸入性肺炎85例(感染组)和未发生吸入性肺炎20例(对照组)。感染组中男38例,女47例;平均胎龄(37.2±5.01)周;平均出生体质量(3 131.07±583.43)g;胸部X线片检查诊断显示：符合新生儿吸入性肺炎改变43例、两肺纹理增粗39例、右下肺炎性病变3例;Apgar评分[10]情况：1 min评10分80例、1 min评9分4例、1 min评7分1例,5 min评10分81例、5 min评9分2例、5 min评8分2例,10 min评10分84例、10 min评9分1例。对照组中男9例,女11例;平均胎龄(37.0±4.92)周;平均出生体质量(3 031.5±636.63)g;胸部X线片检查提示未见异常;Apgar评分情况：1 min评10分16例、1 min评9分4例,5 min评10分16例、5 min评9分2例,5 min评8分2例,10min评10分19例、10 min评9分1例。两组新生儿性别、胎龄、出生体质量比较,差异均无统计学意义(P<0.05),具有可比性。纳入标准：新生儿吸入性肺炎患儿符合文献[11]中的相关诊断标准,并经影像学确诊;有面色苍白、口吐白沫、呛咳、哭声微弱、精神欠佳、反应差、干湿啰音等临床表现;有新生儿高胆红素血症;围生期脑损伤。排除标准：(1)其他病因导致的肺炎;(2)合并其他感染;(3)患有其他严重疾病。患儿家属均知晓本研究,并签署知情同意书。本研究经桂林市人民医院医学伦理委员会审批通过(批号：2021-145KJ)。

1.2仪器与试剂 美国Becton Dickinson公司生产的FACS CantoⅡ流式细胞仪;天津美瑞特医疗科技有限公司提供的CD64检测试剂盒;SYSMEX XN1000血细胞检测仪及其配套试剂;中翰盛泰生物技术股份有限公司生产的Jet-iStarMax仪器及其配套试剂。

1.3方法

1.3.1标本采集 所有患儿均在首次入院未使用抗菌药物和抗病毒药物治疗前采集2.0 mL 乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血,以检测CD64平均荧光强度(MFI)、hs-CRP、WBC、N%。

1.3.2CD64检测 取1支流式管,加入分化抗原CD45-APC、CD14-PerCP-Cy5.5、CD64-PE各5 μL,EDTA-K2抗凝静脉血100 μL,涡旋振荡器上振荡5 s,充分混匀,4 ℃避光孵育30 min,加入1 mL溶血素,振荡混匀后室温避光静置10～15 min;加入2 mL磷酸盐缓冲盐水,1 500 r/min离心10 min,弃上清液,加入500 μL的1×PBS重悬细胞,0.5 h内上机检测。采用BD FACS Canto Ⅱ流式细胞仪进行检测,运用仪器配套分析软件BD FACS Diva进行分析,设置每例样本获取细胞总数为10 000个。获取数据后根据前向角散射光(FSC)、侧向散射光(SSC)光信号和PerCP-CD45荧光信号分别对中性粒细胞群、单核细胞群以及淋巴细胞群进行正确设门,以单核细胞为内部阳性对照、淋巴细胞为内部阴性对照,分别测定中性粒细胞群、单核细胞群、淋巴细胞群的MFI,并按照以下公式计算nCD64指数=(中性粒细胞MFI/淋巴细胞MFI)/(单核细胞MFI/中性粒细胞MFI)。nCD6指数>1.19为阳性。

1.3.3WBC、N%水平 采用激光流式细胞术,用SYSMEX XN1000血细胞分析仪机器配套试剂直接上机分析,检测WBC及N%。

1.3.4hs-CRP水平检测 采用荧光免疫层析术,用Jet-iStarMax仪及其配套试剂按仪器试剂说明书上机检测。hs-CRP>10 mg/L为阳性。

1.4统计学处理 采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析。呈非正态分布的计量资料以M(P25,P75)表示,两组间比较采用Mann-WhitneyU检验;计数资料以例数或率表示,两组间比较采用χ2检验;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析nCD64指数、WBC、N%、hs-CRP对新生儿吸入性肺炎早期的诊断效能。以P<0.05为差异有统计学意义。

2.1两组患儿nCD6指数、WBC、N%、hs-CRP比较 感染组nCD64指数、WBC、N%均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);感染组hs-CRP水平高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组患儿nCD64指数与WBC、N%、hs-CRP水平比较[M(P25,P75)]

2.2nCD64指数、WBC、N%单独诊断新生儿吸入性肺炎早期的效能评估 ROC曲线分析结果显示,nCD64指数单独诊断新生儿吸入性肺炎早期的曲线下面积(AUC)为0.882,灵敏度为88.2%,特异度为75.0%;N%诊断的AUC为0.672,灵敏度为83.5%,特异度为60.0%;WBC诊断的AUC为0.650,灵敏度为57.6%,特异度为75.0%。见表2、图1。

图1 nCD64指数、WBC、N%诊断新生儿吸入性肺炎的ROC曲线

表2 nCD64指数、WBC、N%及HSCRP在新生儿吸入性肺炎早期诊断应用的效果分析

CD64为跨膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族中的一员,可通过抗体依赖的细胞毒性作用、细胞吞噬作用和免疫复合物清除作用实现对病原微生物的消除[12]。有研究显示,nCD64指数是临床公认的细菌感染的特异性标志物,其水平升高与器官的衰竭程度有关[13-14]。正常情况下,CD64主要分布于巨噬细胞、树突状细胞以及单核细胞的表面,中性粒细胞表面表达微量或者不表达,当机体发生感染时,中性粒细胞被迅速激活,释放大量促炎性细胞因子(中性粒细胞集落刺激因子和γ干扰素释放),进而刺激CD64,使之表达量急剧上调[15]。当机体受到感染或内毒素刺激后4～6 h中性粒细胞表面CD64水平升高[16]。流式细胞法检测CD64的结果有3种表示方法：CD64指数、CD64 MFI、CD64百分比,其中CD64指数既能将CD64表达量化,也可减少研究对象、测定仪器等外在因素的影响,具有较高的灵敏度和特异度。外周血nCD64指数在临床诊断和判断细菌感染预后中广泛应用[17]。PATNAIK等[18]研究显示,nCD64指数对婴幼儿感染的判断具有更高的特异度和灵敏度,其作为新的感染指标已被国内外证实在新生儿感染和脓毒血症等疾病中具有早期诊断和疗效监测价值[17-19]。

WBC作为检测细菌性感染的传统指标,可以用来判断患儿的生理病理状态以及反映其免疫状态[20],因个体受应激状态不同,在新生儿出生时其外周血白细胞个体差异较大,对部分吸入性肺炎患儿评估其早期感染灵敏度低。近年来有研究发现N%在辅助诊断感染方面有一定的参考价值,相较于单纯WBC,N%升高更加敏感,细菌感染后在细胞因子和趋化因子的作用下,骨髓释放中性粒细胞增多,导致外周血N%升高[21],但其在新生儿吸入性肺炎早期诊断中的特异度不高。细菌感染引起WBC、N%、hs-CRP等同时升高,而hs-CRP作为反映全身炎症反应过程的重要指标,由于新生儿在感染早期产生的hs-CRP量较少,且升高缓慢,在发生炎症反应24～28 h时其水平达到峰值[22],但其在新生儿在新生儿吸入性肺炎感染早期的诊断中灵敏度并不理想。

新生儿呼吸系统尚未发育完善,免疫屏障不完善,支气管狭窄,呼吸道清理异物能力减低,当胎儿发生宫内缺氧时,极易导致羊水或胎粪进入呼吸道,使呼吸受阻,影响患儿的正常通气,吸入物刺激肺部,与肺部发生化学反应,肺部感染风险增加。本研究结果表明,感染组nCD64指数显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),表明nCD64指数可作为新生儿吸入性肺炎的判断指标。ROC曲线分析结果显示,nCD64指数评估新生儿吸入性肺炎早期的AUC为0.882,高于WBC、N%,提示nCD64指数在新生儿吸入性肺炎的诊断中具有较高的价值。

综上所述,与WBC、N%、hs-CRP这些反映细菌感染的传统标志物相比,nCD64指数在新生儿吸入性肺炎的早期诊断中具有较高价值,值得临床推广。但本研究也存在样本量不足,未对患儿年龄及感染情况进行分层分析等,仍需进一步研究加以证实。

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