20个常用肿瘤实验

下面是小编为大家整理的20个常用肿瘤实验,供大家参考。

　1. 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 标签：

　大肠杆菌 感受态细胞 转化

　本试验以 E.coli DH5a 菌株为受体细胞，并用 CaCl 2 处理，使其处于感受态，然后与 pBS 质粒共保温，实现转化。由于 pBS 质粒带有氨苄青霉素抗性基因（Ampr），可通过 Amp 抗性来筛选转化子。如受体细胞没有转入 pBS，则在含Amp 的培育基上不能生长。转化子扩增后，可将转化的质粒提取出，进行电泳、酶切等进一步鉴定。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/453/454/25118.htm 2. 微生物鉴定中常用的生化反应 标签：

　微生物 生化反应 鉴定

　有些细菌具有合成淀粉酶的力量，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。细菌产生的脂肪酶能分解培育基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培育基 pH 下降，可通过在油脂培育基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为 pH6.8（红）～8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落四周培育基中 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/531/532/31647.htm 3.PCR 扩增 和扩增产物克隆 标签：

　PCR 扩增 克隆

　PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增 DNA或 RNA 的方法.它包括三个基本步骤：(1) 变性(Denature)：目的双链 DNA 片段在94℃下解链；(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对；(3) 延长(Extension):在 Taq DNA 聚合酶合成 DNA的最适温度下，以目的 DNA 为模板进行合成。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/457/458/15663.htm 4. 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 标签：

　大肠杆菌 感受态细胞 转化

　本试验以 E.coli DH5a 菌株为受体细胞，并用 CaCl 2 处理，使其处于感受态，然后与 pBS 质粒共保温，实现转化。由于 pBS 质粒带有氨苄青霉素抗性基因（Ampr），可通过 Amp 抗性来筛选转化子。如受体细胞没有转入 pBS，则在含Amp 的培育基上不能生长。转化子扩增后，可将转化的质粒提取出，进行电泳、酶切等进一步鉴定 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/453/454/25118.htm 5. 人胃癌裸鼠原位种植转移模型建 立 标签：

　裸鼠 胃肿瘤 肿瘤移植

　1969 年 Rygaard 等首次胜利将人类结肠癌移植于裸鼠后，多种人类肿瘤已经在裸鼠体内移植胜利，从而开拓了利用动物讨论人类肿瘤的宽阔前景。以往的讨论大多将癌组织直接移植于裸鼠皮下，但是这种模型由于四周结缔组织包裹，往往形成局部肿瘤而很少发生远处转移。20 世纪九十年月以后国内外学者相继建立了人类肿瘤裸鼠原位移植（orthotopic tranplantation）模型 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/539/564/566/18862.htm 6. 免疫共沉淀(Co-IP) 具体步骤教程 标签：

　免疫 共沉淀 蛋白质

　免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于讨论蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

　其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的很多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。假如用蛋白质 X

　的抗体免疫沉淀 X，那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y 也能沉淀下 具体步骤；http://www.biomart.cn/experiment/430/502/527/529/31631_1.htm 7. PCR 技术原理、试验步骤和应用 标签：

　PCR 原理 步骤 应用

　PCR 技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国 PE Cetus 公司的 Kary Mullis 在 1983 年（1993 年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就将特定的 DNA 片段扩增数百万倍，这种快速猎取大量单一核酸片段的技术在分子生物学讨论中具有举足轻重的意义，极大地推动了生命科学的讨论进展。它不仅是 DNA 分析最常用的技术， 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/457/458/31619.htm 8. 基因芯片试验原理与方法 标签：

　基因芯片 原理 方法

　基因芯片(Gene Chip,DNA Chip)，又称 DNA 微阵列(DNA Micorarray)，是指依据预定位置固定在固相载体上很小面积内的千万个核酸分子所组成的微点阵阵列。在肯定条件下，载体上的核酸分子可以与来自样 品的序列互补的核酸片段杂交。假如把样品中的核酸片段进行标记，在专用的芯片阅读仪上就可以检测到杂交信号。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/586/587/19158.htm 9. 质粒 DNA 提取与纯化 标签：

　质粒 DNA DNA 提取 DNA 纯化

　质粒多为一些双链、环状的 DNA 分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的帮助性遗传单位。质粒是进行分子生物学试验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的 DNA 载体。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/590/597/19364.htm 10. 免疫组化试验方法 标签：

　免疫组化 组织芯片 试验方法

　免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 （荧光素、酶、金属离子、同位素）

　显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的讨论，称为免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（Immunocytochemistry）。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/502/527/529/22954.htm 11. Western Blot 免疫印迹试验操作规程 标签：

　western-blot 免疫印迹 蛋白质

　与 Southern 或 Northern 杂交方法类似，但 Western Blot 采纳的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过 PAGE分别的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝 酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分别的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗 体起免疫 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/465/473/31498.htm 12. 体外细胞的原代培育、传代培育、冻存和复苏 标签：

　传代培育 原代培育 冻存 复苏

　细胞培育可分为原代培育和传代培育。直接从体内猎取的组织细胞进行首次培育为原代培育；当原代培育的细胞增殖达到肯定密度后，则需要做再培育， 即

　将培育的细胞分散后，从一个容器以 1：2 或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培育，为传代培育，传代培育的累积次数就是细胞的代数。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/488/490/493/31633.htm 13. 荧光原位杂交 标签：

　荧光 原位杂交

　荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是 20 世纪 80 年月末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上进展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构讨论、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化讨论待很多领域。FISH 的基本原理是用已知 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/590/596/19355.htm 14. 细胞凋亡试验 标签：

　细胞 细胞凋亡

　细胞死亡依据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着特别重要的作用。它是细胞在肯定生理 条件下一系列挨次发生大事的组合，是细胞遵循肯定规律自己结束生命的自主掌握过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/488/498/25759.htm 15. 染色质免疫共沉淀技术（ChIP ）

　标签：

　染色质 免疫共沉淀

　甲醛处理细胞---收集细胞，超声破裂---加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合---加入 ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物，并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合---洗脱，得到富集的靶蛋白

　-DNA 复合物---解交联，纯化富集的 DNA-片断---PCR 分析。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/590/598/31641.htm 16. 变性梯度凝胶电泳 标签：

　变性梯度 凝胶 电泳

　变性梯度凝胶电泳（DGGE）是一种依据 DNA 片段的熔解性质而使之分别的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在肯定条件下可以解链，称之为变性。核酸 50%发生变性时的温度称为熔解温度（Tm）。Tm 值主要取决于 DNA 分子中 GC 含量的多少。DGGE 将凝胶设置在双重变性条件下：温度 50~60 ℃，变性剂 0~100%。当一双链 DNA 片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时， 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/465/477/31629.htm 17 小鼠组织切片免疫组化试验步骤 标签：

　组织切片 免疫组化

　免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的讨论，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

　具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/502/509/510/25808.htm 18. 蛋白质的表达、分别、纯化 标签：

　蛋白质 表达 分别 纯化

　克隆基因在细胞中表达对理论讨论和试验应用都具有重要的意义。通过表达能探究和讨论基因的功能以及基因表达调控的机理，同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的讨论。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系

　统，其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的 80%。本试验中，携带有目标蛋白基 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/465/467/31623.htm 19. DNA 重组试验方法 标签：

　质粒 DNA 重组

　DNA 重组是将外源 DNA 与载体分子连接，这样重新组合的 DNA 叫做重组体或重组子。DNA 重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法。

　重组的 DNA 分子是在 DNA 连接酶的作用下，有 Mg2+、ATP 存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源 DNA 分子进行连接。常用的 DNA 连接酶是 T4 噬菌体 DNA连接酶，它不但能使粘性末端的 DNA 分子连在一起，而且能使平末 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/431/441/26630.htm 20. 逆转录- 聚合酶链反应（RT-PCR ）

　标签：

　逆转录 RT-PCR 操作步骤

　逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总 RNA，以其中的 mRNA 作为模板，采纳 Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA。再以 cDNA 为模板进行PCR 扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR 使 RNA 检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量 RNA 样品 具体步骤：http://www.biomart.cn/experiment/430/457/459/31434.htm