血清E-cadherin、VEGF、nm23-H表达在同步放化疗的中晚期子宫颈鳞癌患者中的临床意义

邱华英，曾 程，王小波

(1.浙江金华广福肿瘤医院 检验科，浙江 金华 321000；
2.杭州艾迪康医学检验中心，浙江 杭州 310030)

目前，以顺铂为基础的同步放化疗方案是治疗中晚期子宫颈癌的首选，但仍有部分患者对放化疗反应性低[1]。近年来发现，肿瘤自身对同步放化疗的敏感性是影响疗效的关键因素[2-3]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)为促血管生成及淋巴管形成的重要因子，在子宫颈癌发生、进展及侵袭过程中有着关键作用[4]。上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)为钙依赖型粘附分子，在维持上皮细胞正常形态及连接中起到重要作用，其低表达或表达缺失均与肿瘤侵袭、转移有明显关联[5]。肿瘤转移抑制基因(nm23-H)在较多恶性肿瘤中均呈明显低表达，在抑制肿瘤转移中有一定的作用[6]。本研究回顾性分析100例中晚期子宫颈鳞癌患者的临床资料，探讨中晚期子宫颈鳞癌患者同步放化疗前后血清VEGF、E-cadherin、nm23-H表达水平的变化及意义。

1.1 研究对象 回顾性收集2016年1月—2019年12月浙江金华广福肿瘤医院收治的中晚期子宫颈鳞癌患者100例的临床资料。纳入标准：①经病理确诊；
②国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅱb—Ⅲ b期[7]；
③入组前未接受任何抗肿瘤治疗；
④接受同步放化疗；
⑤临床及随访资料完整；
⑥患者知情同意。排除标准：①心肝肾肺器质性功能障碍；
②同时有其他恶性肿瘤；
③远处器官转移；
④自身免疫性功能障碍；
⑤合并脑血管疾病；
⑥无法配合治疗；
⑦对研究用药过敏；
⑧合并全身急慢性感染。本研究经医院伦理委员会批准。入组患者年龄40～69岁，平均(48.91±5.78)岁；
FIGO分期：Ⅱ b期40例，Ⅲa期34例，Ⅲ b期26例；
肿瘤直径：≤4 cm 58例，>4 cm 42例；
盆腔淋巴结转移36例。

1.2 治疗方法 所有患者入院后均接受同步放化疗治疗，放疗采用体外联合腔内放疗的方式，采用6～15 MV X线直线加速器，先行全盆照射，剂量1.8～2.0 Gy/次，5次/周，总剂量30 Gy；
后改为盆腔四野照射，1.8～2.0 Gy/次，4次/周，总剂量25 Gy，并交替行192Ir后装腔内放疗，6 Gy/次，总剂量36～42 Gy，1次/周，共放疗6～7次，腔内放疗当日不行体外放疗。放疗同时行顺铂(山东凤凰制药股份有限公司生产，国药准字H20056422)单药化疗，40 mg/m2，1次/周，共化疗4～6次。

1.3 观察指标

1.3.1 血清E-cadherin、VEGF、nm23-H mRNA水平 治疗前、治疗3个月后，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清E-cadherin、VEGF水平，采用荧光定量聚合酶链式反应法(RT-PCR)测定血清nm23-H mRNA表达情况。E-cadherin试剂盒购自晶美生物工程有限公司，VEGF试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，均严格参照试剂使用说明进行操作，Bio-Rad Model 550型酶标仪(购自美国Bio-Rad公司)读取光密度值，并绘制标准曲线获得E-cadherin、VEGF浓度。RNA提取、逆转录反应试剂盒及RT-PCR引物均购自大连宝生物工程有限公司，提取总RNA，nm23-H引物序列：上游：5"-AGGGCAGACCACATTGCTTTTC-3"，下游：5"-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3"，长度185 bp；
内参β-actin上游引物；
5"-GCTGGGAGGAAGCATTTTTAATC-3"，下游：5"-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3"，长度186 bp。RT-PCR反应条件：95 ℃预变性10 min，1个循环，95 ℃变性15 s，60 ℃退火/延伸1 min，循环45次，以目的基因/内参基因表达量作为nm23-H mRNA相对表达量。

1.3.2 疗效评定 治疗3个月后，参照实体瘤疗效标准[8]评定近期疗效。完全缓解(CR)：可测病灶消失，且持续超过4周；
部分缓解(PR)：肿瘤最大直径及最大垂直径线乘积缩小超过50%，且维持超过4周；
稳定(SD)：肿瘤最大直径及最大垂直径线乘积缩小不超过50%或增大不超过25%；
进展(PD)：肿瘤最大直径及最大垂直径线乘积增大超过25%或有新病灶出现。PR+CR的患者为治疗敏感，SD+PD的患者为治疗抗拒。

1.3.3 复发和转移 所有患者完成为期1年的随访调查，以门诊复查或电话随访的形式，了解肿瘤进展情况，包括复发、转移。

2.1 临床资料 入组患者治疗3个月后，治疗敏感77例，包括CR 34例、PR 43例；
治疗抗拒23例，包括SD 17例、PD 6例；
2组年龄、肿瘤大小、分期的差异均无统计学意义(P>0.05)，治疗抗拒组淋巴结转移比例高于治疗敏感组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 治疗敏感和治疗抗拒患者的基线资料比较

2.2 不同分期患者放化疗前后血清E-cadherin、VEGF、nm23-H的比较 治疗前，子宫颈癌Ⅲ期患者的血清E-cadherin、nm23-H低于Ⅱb期者，VEGF高于Ⅱb期者；
治疗3个月后，各分期患者的E-cadherin、nm23-H上升，VEGF降低，Ⅲ期患者血清E-cadherin、nm23-H低于Ⅱb期者，VEGF高于Ⅱb期者；
差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同分期子宫颈癌患者同步放化疗前后血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较

2.3 不同疗效子宫颈癌患者的血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较 治疗敏感组患者的血清E-cadherin、nm23-H 水平高于治疗抗拒组，VEGF水平低于治疗抗拒组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 不同疗效患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较

2.4 不同随访结局患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较 100例患者均完成1年随访，随访期间复发8例、淋巴结转移11例、累积肿瘤进展19例，肿瘤进展患者血清E-cadherin、nm23-H水平低于未进展者，VEGF水平高于未进展者，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 不同随访结局患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较

2.5 子宫颈癌患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H表达相关性分析 Pearson相关分析结果显示，E-cadherin与VEGF、nm23-H(r=-0.178、0.007)、VEGF与nm23-H(r=0.024)均无显著相关性(均P>0.05)，见图1。

图1 中晚期子宫颈癌患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H表达的相关性分析散点图

Liu等[9]研究认为，肿瘤新生血管生成与子宫颈癌生物学行为及治疗反应存在密切联系。VEGF为特异性较高的促血管生成因子，以旁分泌的形式特异性作用于血管内皮细胞，刺激血管及淋巴微管，不仅可促进肿瘤内新生血管生成，同时可为癌细胞远处转移创造条件[10-11]。本研究结果显示，中晚期子宫颈鳞癌患者同步放化疗前血清VEGF水平较高，放化疗后不同分期子宫颈癌患者VEGF均明显降低，治疗敏感组血清VEGF水平低于治疗抗拒组，随访肿瘤未进展患者血清VEGF水平低于进展者，提示中晚期子宫颈鳞癌患者血清VEFG水平与临床分期、同步放化疗敏感性及肿瘤复发、转移均存在一定的关联，与苏文芳[12]研究结论一致。分析原因可能为：VEGF对肿瘤新生血管形成起促进作用，VEGF高表达可诱导内皮细胞增殖，促进基质细胞分泌大量基质金属蛋白酶，为肿瘤生长提供营养物质，同时促成癌细胞穿透血管壁进入血循环，增加癌细胞侵袭性，导致肿瘤增殖、浸润及转移，抑制细胞损伤修复，降低对同步放化疗的敏感度。

Cadherin为典型钙黏附素，系介导同类细胞互相黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白，是维持正常细胞连接的关键分子，对维持正常上皮细胞形态及完整性有重要作用[13]。本研究发现，同步放化疗前，中晚期子宫颈鳞癌患者血清E-cadherin水平较低，且Ⅲ期子宫颈癌E-cadherin水平低于Ⅱb期；
同步放化疗后，患者血清E-cadherin水平上升，以Ⅱb期患者上升更突出，且治疗敏感组E-cadherin上升幅度较治疗抗拒组高，随访肿瘤未进展者血清E-cadherin水平高于肿瘤进展者，提示E-cadherin可能参与子宫颈鳞癌发病过程，可能为影响子宫颈鳞癌放化疗敏感性及肿瘤浸润、转移的相关因素，推测E-cadherin对子宫颈癌疗效的影响主要与肿瘤细胞发生间质上皮转化有关，促使间质上皮转化的癌细胞迁移至其他组织，逃离放疗辐射及化疗药效作用，经转化形成转移灶，降低同步放化疗反应性，导致肿瘤侵袭、转移。

nm23-H基因为肿瘤转移抑制基因，与原癌基因作用相反，可抑制细胞增殖及分化，其功能丧失可引起正常细胞恶性转化[14]。本研究发现，同步放化疗前中晚期子宫颈鳞癌患者血清nm23-H表达水平较低，Ⅲ期低于Ⅱb期，经同步放化疗后，患者血清nm23-H水平上升，Ⅱb期上升幅度高于Ⅲ期，且以治疗敏感组及随访肿瘤未进展患者的nm23-H上升幅度更高，提示nm23-H与子宫颈鳞癌发病、治疗反应及肿瘤浸润、转移存在紧密联系，低nm23-H表达通常提示治疗反应低及不良预后，考虑可能原因为：低mm23-H表达肿瘤负调控作用削弱或降低，对细胞分裂素活化蛋白激酶抑制作用丧失，提升其增殖活性，导致癌细胞增殖、分化、侵袭、转移；
而放化疗均通过直接或间接损伤DNA，阻滞细胞增殖达到控制肿瘤细胞生长的目的，nm23-H、E-cadherin低表达及VEGF高表达的子宫颈癌患者肿瘤恶性程度高，癌细胞增殖活性强、血管生成活跃，影响同步放化疗效果。但进行相关性分析发现，三者间无明显相关性，考虑三种因子可能通过不同的生物学途径影响放化疗效果，并参与子宫颈癌进展过程，对其确切机制尚待进一步研究。

综上所述，中晚期子宫颈鳞癌患者血清E-cadherin、nm23-H呈低表达，VEGF呈高表达，临床分期较差的子宫颈鳞癌患者血清E-cadherin、nm23-H表达更低，VEGF表达更高，且三者均与患者同步放化疗治疗反应及肿瘤复发、转移有关，有望作为评估患者同步放化疗疗效及预测肿瘤复发、转移的新方向。

猜你喜欢子宫颈癌子宫颈鳞癌经阴道子宫颈常规超声联合剪切波弹性成像在评估孕晚期早产中的应用*中国医学创新(2022年29期)2022-11-03子宫颈扩张双球囊与欣普贝生在孕晚期促宫颈成熟中的应用中国药学药品知识仓库(2022年2期)2022-03-23恶性胸膜间皮瘤、肺鳞癌重复癌一例云南医药(2021年3期)2021-07-21肽基脯氨酰同分异构酶(Pin1)对子宫颈癌细胞脂质代谢的作用昆明医科大学学报(2021年1期)2021-02-07如何早期发现子宫颈癌康颐(2020年13期)2020-11-10得了子宫颈癌怎么办？抗癌之窗(2020年2期)2020-07-14HPV疫苗和筛查：人类癌症防治的典范抗癌之窗(2020年2期)2020-07-14头颈部鳞癌靶向治疗的研究进展中华老年口腔医学杂志(2016年2期)2017-01-15子宫颈扩张球囊在足月妊娠产妇中的应用效果分析中国当代医药(2015年10期)2015-03-01整合素αvβ6和JunB在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义癌变·畸变·突变(2015年3期)2015-02-27