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新冠病毒检测技术分析研究

来源:公文范文 时间:2023-11-26 20:24:01 推荐访问: 分析研究 检测技术 病毒

姚文娟

【摘要】新型严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染人体后引起新型冠状病毒肺炎(COVID-19),目前在全球大范围流行,对人类健康造成巨大的威胁。因为该病毒是RNA正链病毒,在传播过程非常容易变异,目前流行的奥密克戎突变株,大多是无症状感染者,具有传播隐秘的特点,因此找到快速,准确,高效诊断该病毒的检测手段非常重要。本文就目前新冠病毒检测技术进行汇总分析,旨在为保障公共卫生安全,预防和控制感染传播提供诊断支持与帮助。

【关键词】新冠病毒;检测技术;研究

【中图分类号】R51 【文献标识码】A 【文章编号】2026-5328(2022)04--01

新型严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)从2019年流行开后,一直以非常快的速度传播,从最初的野生型病毒不断突变进化成现在的奥密克戎突变株,目前全世界累计感染人数520405719人,现有确诊人数22282379人,最近流行的奥密克戎突变株,传播力度强,无症状感染者居多。想要快速控制疫情的传播,需要找到快速,准确,高效诊断该病毒的检测手段。目前检测新冠病毒的方法有逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)达到扩增病原体的核酸(RNA),检测病毒的蛋白即抗原检测,检测病毒感染后产生的抗体即抗体检测[1],本文就目前新冠病毒检测技术进行汇总分析,旨在为保障公共卫生安全,预防和控制感染传播提供诊断支持与帮助。

1. 核酸检测

随着SARS-CoV-2基因组测序解析工作的完成,解码该病毒序列结构,此病毒具有大概29000个碱基,12个个蛋白编码区/开放读码框(ORF),开放阅读框ORF 1ab 与SARS病毒有着明显的不同,而且这个区域相对保守,变异性较小,因此成为检测SARS-CoV-2的一个生物靶标[2]。此外,N和E蛋白的基因也能作为检测的序列。目前常用的检测技术有实时荧光逆转录PCR 法,国内使用该技术一般会同时检测ORF1ab 基因和N 基因,这个检测技术具有检测速度较快、成本相对低廉的特点,不过需要设计出灵敏度好、特异性强的PCR 引物和荧光探针来提高扩增效率,减少假阳性率出现,常用的RT-PCR方法,提取23分钟,扩增90分钟;此外还有恒温扩增-实时荧光法(RT-LAMP),该技术具有灵敏度高,反应速度快的特点,很适合在边境口岸进行快速检测;RNA捕获探针法,这种方法检测病毒的灵敏度和特异性都很强,实现高通量检测,排除人为误差。

2. 抗原检测

SARS-CoV-2冠状病毒是β属含有包膜的单个正义链RNA病毒,大小为直径60 ~140 nm,呈现为圆形或椭圆形的颗粒,病毒的包膜蛋白能够向四周延伸的凸起,所以像刺突一样,因此也称为冠状病毒。SARS-CoV-2冠状病毒的构成主要是以下几个蛋白:核衣壳蛋白( nucleocapsid protein ,N),刺突表面糖蛋白(spike protein ,S),包膜蛋白(envelope protein,E),基质蛋白( matrix protein , M),其中S蛋白上的RBD受体能够和人体的ACE2受体结合侵入细胞,因为S蛋白位于病毒表面,容易被免疫系统识别,N蛋白在包装病毒基因组RNA,在病毒复制、组装、释放和干扰宿主细胞的过程中有着重要的作用[3],所以這两种蛋白常作为检测靶标。SARS-CoV-2抗原检测能够在大规模筛查中起到重要作用,在RT-PCR检测不太方便或者结果出具较慢的时候,可以快速识别感染SARS-CoV-2的患者,通过这种检测能够有效防止病毒传播,对患者进行及时的治疗,第九版新冠诊疗指南提出使用抗原检测,抗原检测不需要专业人士进行操作,普通人在家就能进行检测,上海疫情期间很多居民都是采用抗原检测进行自测,极大的提高检测效率,减少病毒传播的风险。目前使用最多的是胶体金免疫层析法(GICA法),该方法是基于抗原抗体的特异性结合和显色原理,通过人源化特异性的N蛋白和S蛋白的抗体来检测是否含有病毒抗原,目前常用的是卡条形式,通过采取鼻拭子样品与稀释液混合,之后用滴瓶加样到上样孔中,等待10~15分钟即可出结果,通过看T线和C线来判断结果,操作简便,出结果快捷,成本低廉、不需要专业设备,适合大范围筛查。不过,快速抗原检测技术没有RT-PCR检测敏感,只有在病毒载量很高时,抗原检测的灵敏度和特异性才较好。总体来说,抗原检测的灵敏度相对不高,即使检测阴性也不能完全排除感染病毒的可能性,会有假阴性存在。

3. 抗体检测

人体感染新冠病毒后,外膜结构蛋白就会刺激体内免疫细胞产生特异抗体,分为IgM或IgG二类抗体,IgM抗体出现较早,IgG抗体出现较晚[4]。目前常用的检测技术有胶体金免疫层析法、酶联免疫法、磁微粒化学发光法、上转发光免疫层析法、量子点荧光免疫层析、化学发光法、直接化学发光法和等。使用较多的还是胶体金免疫层析法(GICA法),该方法是基于抗原抗体的特异性结合和显色原理,通过胶体金标记的S和N蛋白结合鼠IgG,C线是羊抗鼠的IgG抗体,T线是鼠抗人的IgM和IgG抗体,通过采取静脉全血、血清或血浆样品与稀释液混合,之后用滴瓶加样到上样孔中,等待10~15分钟即可出结果,通过看T线和C线来判断结果,操作简便,出结果快捷,成本低廉、不需要专业设备。酶联免疫法也可以检测抗体,包括中和抗体,总抗体,总的来说,IgA的ELISA 检测的灵敏度更高,IgG的ELISA检测特异性更高[5]。

4. 小结

抗体血清学相比,核酸检测能够检测到处于窗口期的患者,及早发现感染者,是新型冠状病毒检测的“金标准”,但是对检测设备或平台要求较高,高灵敏度的RT-PCR仪器价格昂贵,对实验室的洁净度和操作人员要求也较高。此外,核酸检测耗时较长,考虑到样本运输、样本积压的情况,通常最快4小时才可以报告结果。抗原或抗体检测时间较短,但是特异性和灵敏度不如核酸检测。

参考文献:

[1] 王淑燕,李娜,张欣悦,等.新冠病毒 SARS-CoV-2检测方法研究进展[J].实验室研究与探索,2020,39(5):1-7.

[2] 武英,周洪彬,张珏,等.新冠肺炎病毒SARS-CoV-2国内检测方法汇总[J]. 国外医药抗生素分册,2020,41(4):296-301.

[3] 鲁双艳,吴琳,刘成宇,等. 新型冠状病毒特异性抗体IgM、IgG的临床意义[J].中国输血杂志,2021,34(8):861-864.

[4] 余静怡,余方友. 新冠病毒实验室常见检测方法[J].中华医院感染学杂志,2022,32(4):635-640.

[5] 黄红艳. 新型冠状病毒检测技术专利分析[J].广东化工,2022,49(6):177-179.

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