孕妇血清Collectrin和NEP表达水平与子痫前期的相关性研究

王 芬，陈 媛，谢 环（1.鄂东医疗集团黄石市妇幼保健院/湖北理工学院附属妇幼保健院a.产科；
b.检验科，湖北黄石 435099；
.宜昌市第二人民医院/三峡大学第二人民医院妇科，湖北宜昌 443008）

子痫前期（preeclampsia，PE）是指妊娠20周后出现高血压和蛋白尿，是导致全球范围内产妇和围产儿死亡的重要原因，早期预防和诊断PE有助于改善母婴预后[1]。PE发病背景复杂，至今尚未建立有效的预测方法，探索PE病理生理机制是当前研究热点。目前业界公认PE血管内皮功能障碍是PE发病的中心环节之一[2]。收集素（Collectrin）是肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system，RAS）的新成员，能通过内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）/一氧化氮（nitric oxide，NO）途径调节血管内皮功能，进而影响血压水平[3]。血管活性物质具有扩张血管、调节血流量、调节血压等多种作用[4]。脑啡肽酶（neprilysin，NEP）是一种锌依赖性金属肽酶，在血管活性物质的降解中发挥重要作用[5]。已有研究报道，PE患者胎盘中NEP表达显著上调[6]。目前关于血清Collectrin和NEP水平与PE的相关性尚缺乏报道，本研究旨在观察PE患者血清Collectrin，NEP水平变化，并分析二者对PE的预测价值，以期为PE早期诊断提供参考。

1.1 研究对象 选取2020年1月～2021年1月湖北理工学院附属妇幼保健院收治的87例PE患者为PE组，年龄23～37（27.45±5.31）岁；
孕周28～39（32.57±2.71）周；
孕次1～3（1.45±0.50）次；
体质指数24～37（30.33±4.18）kg/m2；
轻度子痫前期（mild preeclampsia，MPE）38例和重度子痫前期（severe preeclampsia，SPE）49例。纳入标准：①符合《妊娠期高血压疾病诊治指南（2020）》[7]PE诊断标准；
②自然受孕者；
③单胎妊娠者；
④临床资料完整者；
⑤患者及家属均知情研究。排除标准：①血液、免疫系统异常者；
②恶性肿瘤者；
③并发其他妊娠期疾病者；
④严重感染者；
⑤胎儿畸形、产前胎膜破裂、绒毛膜羊膜炎者。另选取同期42例健康妊娠妇女为对照组，年龄22～40（28.12±4.53）岁；
孕周24～38（32.52±3.13）周；
孕次1～3（1.40±0.45）次；
体质指数24～37（30.42±3.87）kg/m2。两组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 仪器与试剂 Multiskan™ FC酶标仪（赛默飞）；
Collectrin，NEP试剂盒（杭州新龙生物科技有限公司）。

1.3 方法 采集所有研究对象入组时静脉血液，3 000r/min离心15min，半径10cm，取上清液，ELISA检测血清Collectrin，NEP水平，所有操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.4 统计学分析 选用SPSS26.0统计学软件，计数资料以n（%）表示，χ2检验；
计量资料经Shapiro-Wilk检验，正态分布以均数±标准差（±s）表示，t检验；
偏态分布计量资料以中位数（四分位间距）[M（P25，P75）]表示，U检验；
Pearson/Spearman相关性分析PE患者血清Collectrin，NEP水平与血压的相关性；
ROC曲线分析血清Collectrin，NEP水平对PE的预测价值，曲线下面积（area under the curve，AUC）采用Z检验；
P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 两组血压和血清Collectrin，NEP水平比较见表1。PE组收缩压、舒张压、NEP水平高于对照组，Collectrin水平低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

表1 两组血压和血清Collectrin，NEP水平比较[±s，M（P25, P75）]

表1 两组血压和血清Collectrin，NEP水平比较[±s，M（P25, P75）]

项目 PE组（n=87） 对照组（n=42） t/Z P收缩压（mmHg） 168.40±17.00 114.88±8.89 23.462 ＜0.001舒张压（mmHg） 110.33±12.89 66.60±7.33 24.491 ＜0.001 Collectrin（pg/ml） 71.20（62.82，87.48） 102.72（97.76，105.84） 8.499 ＜0.001 NEP（pg/ml） 241.39±67.31 163.82±66.00 6.172 ＜0.001

2.2 不同病情严重程度患者血压和血清Collectrin，NEP水平比较 见表2。SPE组收缩压、舒张压、NEP水平高于MPE组，Collectrin水平低于MPE组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

表2 不同病情严重程度患者血压和血清Collectrin，NEP水平比较 [±s，M（P25, P75）]

表2 不同病情严重程度患者血压和血清Collectrin，NEP水平比较 [±s，M（P25, P75）]

项目 MPE组（n=38） SPE组（n=49） t/Z P收缩压（mmHg） 162.03±17.28 173.35±15.19 3.247 0.002舒张压（mmHg） 105.63±13.34 113.98±11.38 3.147 0.002 Collectrin（pg/ml） 84.00（68.10，95.33） 63.71（60.61，80.46） 4.433 ＜0.001 NEP（pg/ml） 204.58±62.96 269.93±56.19 5.104 ＜0.001

2.3 PE患者血清Collectrin，NEP水平与血压的相关性 Pearson/Spearman相关性分析显示，PE患者血清Collectrin水平与收缩压、舒张压呈负相关（r=-0.656，-0.748，均P＜0.001），NEP水平与收缩压、舒张压呈正相关（r=0.638，0.694，均P＜0.001）。

2.4 血清Collectrin，NEP水平单独及联合检测对PE的预测价值 见表3和图1。ROC曲线显示，血清Collectrin＋NEP预测PE的AUC大于Collectrin，NEP单独预测，差异均有统计学意义（Z=2.984，3.540；
P=0.003，0.000）。

表3 血清Collectrin，NEP水平单独及联合检测对PE的预测价值

图1 血清Collectrin，NEP水平单独及联合预测PE的ROC曲线

子痫前期（PE）是常见妊娠期高血压疾病之一，妊娠期高血压疾病患病率随年龄增长而增高，随着“全面两孩”和“三孩生育”政策的实施，我国孕产妇初育年龄和分娩年龄逐年上升，由此推测PE患病率也逐年升高。PE是导致妊娠相关疾病发生和死亡的主要因素，是一种存在多机制发病异质性、多因素发病异源性的多因素、多阶段、多通路疾病。病理改变包括孕妇过度耐受滋养细胞炎性反应、滋养细胞凋亡和坏死增多、遗传印记、脂蛋白毒性、免疫不耐受、慢性子宫胎盘缺血等，其临床表现呈多样性和复杂性，个体首发症状表现不一，大多患者未能及时识别和早发现以至于发展为重症或存在严重靶器官并发症，需转诊三级医疗救治中心进行多学科联合救治，因此早期诊断PE对早期干预、处理具有重要意义。目前研究认为，滋养细胞浅着床导致胎盘缺血、缺氧引起的血管内皮损伤和氧化应激是PE发生的重要原因[8]。

血管内皮对维持人体血液循环具有重要作用，血管内皮细胞能分泌血管舒张因子和血管收缩因子，调节血管的舒缩平衡，使血流循环趋于稳定，当血管内皮功能障碍导致血管舒缩状态失衡，则会引起包括高血压在内的多种心血管事件[9]。NO是有效的血管扩张剂，由皮内型一氧化氮合酶（eNOS）催化 L-精氨酸转化而成，PE中内皮功能障碍的一个关键特征为缺乏L-精氨酸，使eNOS不能在二聚体形态下将L-精氨酸转化为NO，导致eNOS解离为单体时释放大量超氧阴离子，NO生物利用度降低，即eNOS解偶联，进一步促进血管中的氧化应激水平升高，导致血管内皮功能障碍[10]。肾素-血管紧张素系统（RAS）是由一系列肽类激素和酶组成的体液调节系统，主要功能为调节人体水电解质、血压平衡，以维持机体内环境恒定，RAS失调是PE发生的几个关键途径之一[11]。Collectrin是RAS中的孤立成员，最初由CECHOVA等[12]在一项筛查中发现，Collectrin在小鼠肾脏全切除后和高盐饮食期间表达上调，而缺乏Collectrin可引起盐敏感度增强、压力性尿钠排泄受损、血压升高。这项研究提示，Collectrin很可能在血压中发挥直接作用。近年YANG等[13]研究也证实，Collectrin能通过调节血管内皮损伤中NO和氧化应激水平调节血压稳态。但关于Collectrin与PE的关系尚不明确。我们研究结果显示，PE组血清Collectrin水平明显降低，且发展至SPE后进一步降低，说明Collectrin参与PE发生发展。进一步分析显示，PE患者血清Collectrin水平与收缩压、舒张压呈负相关关系，说明Collectrin可通过影响血压水平参与PE发生发展。其机制可能与Collectrin能帮助L-精氨酸转化合成NO，以维持NO与超氧阴离子平衡，对内皮依赖性血管扩张和血压发挥保护作用有关[12-13]。实验发现，小鼠Collectrin缺失会引起血管内皮功能障碍和高血压，上调Collectrin能调节内皮细胞对L-精氨酸的摄取，促进eNOS催化 L-精氨酸转化为NO，改善血管内皮功能和血压水平[14]。这些研究提示Collectrin能通过影响外周血管阻力和肾钠处理来调节血压，但关于Collectrin参与PE的具体机制有待进一步研究。

脑啡肽酶（NEP）负责机体内源性血管活性物质的降解，包含50多种肽底物，广泛分布于心脏、血管、肾脏、神经细胞、胃肠道和呼吸道以及炎症介质中，在心血管系统中，NEP能通过水解利钠肽、缓激肽、P物质、肾上腺髓质素等血管扩张底物和内皮素1、血管紧张素2等血管收缩底物而发挥作用，其中又以利钠肽最为重要[5]。利钠肽是平衡水钠代谢和维持血压的主要调控因子，能促进血管舒张，抵抗血管收缩，NEP能通过降解利钠肽使其失去生物学功能，抑制NEP能抑制利钠肽降解，增强利钠肽生物效应，目前NEP抑制剂如沙库巴曲缬沙坦已被广泛用于高血压治疗[15]。NEP在体液调节系统RAS中也存在肽底物，包括血管收缩肽和血管扩张剂利钠肽[16]。同时研究报道，NEP在PE患者胎盘及胎盘和外周循环中分离的合体滋养层细胞外囊泡中表达上调[6]。NEUMAN等[17]研究指出，尽管利钠肽对PE的诊断价值有限，但却是PE发生的独立决定因素。这些研究提示NEP或可成为PE生物标记物。我们研究结果显示，PE组血清NEP水平明显升高，且发展至SPE后进一步升高，说明NEP参与PE发生发展，这与GILL等[6]研究报道NEP在PE患者胎盘、合体滋养层细胞外囊泡中表达上调结果一致。我们进一步分析显示，PE患者血清NEP水平与收缩压、舒张压呈正相关关系，说明NEP也可通过影响血压水平参与PE发生发展。其机制可能与PE胎盘发育异常过程中绒毛膜绒毛中NEP表达增加，导致血清NEP水平升高，干扰利钠肽等血管活性物质调节，导致血管内皮功能障碍和高血压发生有关。研究指出，NEP在绒毛膜滋养层细胞中表达增加，能通过干扰母胎界面血管活性分子的局部调节导致PE发生[18]。值得关注的是，NEP包含多种肽底物，现有研究多以利钠肽为研究起点，其他肽底物也可能从多个方面影响血压水平，但还需研究证实。ROC曲线显示，血清Collectrin，NEP水平对PE具有一定预测价值，且Collectrin＋NEP预测PE的AUC显著增加，说明联合检测血清Collectrin，NEP水平有助于更好指导PE诊治。

综上所述，PE患者血清Collectrin水平降低，NEP水平升高，与血压水平密切相关，可作为PE预测指标。但本研究样本量较少，关于Collectrin，NEP与PE的相关机制有待进一步研究。

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