侯秋苑,李惠敏,林凤屏,冯白茹,殷蕾,梁可
(1.惠州卫生职业技术学院,广东惠州,516025;
2.惠州市药用植物研究与开发重点实验室,广东惠州,516025;
3.惠州市食品药品检验所,广东惠州,516025)
理冲汤出自清末名医张锡纯所著《医学衷中参西录》上册,由生黄芪、党参、白术、生山药、天花粉、知母、三棱、莪术、生鸡内金九味药材组成,具有益气行血,调经祛瘀之功效[1]。笔者前期研究了理冲颗粒的制备工艺和含量测定方法。为了更有效地控制其质量,本实验对理冲颗粒进行薄层色谱鉴别研究,为理冲颗粒的质量控制提供参考依据。
KQ-250 超 声 波 清 洁 机;
BWS-20 恒 温水槽水浴锅;
XS205 分析天平(METTLER TOLEDO);
SL-373 医 药 阴 凉 柜;
DHG-9070A电热鼓风干燥箱;
薄层硅胶预制板(烟台市化学工业研究所、Merck);
CAMAG REPROSTAR 3薄层数码成像系统(瑞士卡玛公司)。
理冲颗粒(自制);
理冲颗粒阴性(自制);
黄芪甲苷对照品(北京世纪奥科生物技术有限公司,批号:2001220,纯度≥98%);
三棱对照药材(中国食品药品检定研究院,批号:121521-201905)。水为超纯水,其他试剂为分析纯。
2.1.1 理冲颗粒溶液的制备[2]
取理冲颗粒10g,加4%浓氨的80%甲醇50mL,回流1h,过滤,滤液蒸干,残渣用80%甲醇溶解,定容到5mL 的容量瓶,制成理冲颗粒溶液。
2.1.2 黄芪甲苷对照品溶液的制备[2]
称取黄芪甲苷对照品10mg,加80%甲醇制成每1mL 含0.1mg 的溶液,即得。
2.1.3 理冲颗粒阴性溶液的制备
取不含黄芪的理冲颗粒10g,按“2.1.1”流程制成理冲颗粒阴性溶液。
2.1.4 展开系统的考察[3]
分别吸取理冲颗粒溶液、黄芪甲苷对照品溶液和理冲颗粒阴性溶液各1 ~5μL,分别点于同一块硅胶G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的下层溶液为展开系统Ⅰ[4]、三氯甲烷-甲醇-水(15:7:2)的下层溶液为展开系统Ⅱ、三氯甲烷-甲醇-水(17:7:2)的下层溶液为展开系统Ⅲ,展开,拿出,自然晾干,再喷适量10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色,置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图1。结果表明,展开系统Ⅱ的展开效果最佳,阴性溶液色谱在相应位置上无干扰,因此选择三氯甲烷-甲醇-水(15:7:2)的下层溶液为该薄层鉴别的展开系统。
图1 展开系统考察
2.1.5 耐用性考察[5]
(1)不同薄层板的考察。分别吸取理冲颗粒溶液、黄芪甲苷对照品溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL,分别点于3 种不同的硅胶G 板上,以三氯甲烷-甲醇-水(15:7:2)的下层溶液为展开剂,展开,拿出,自然晾干,再喷适量10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色,置于365nm 紫外光灯下检视。结果见图2。结果表明,Merck 板的分离效果优于其他板,但影响不大。
图2 薄层板考察
(2)不同展开温度的考察。分别吸取理冲颗粒溶液、黄芪甲苷对照品溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL,分别点于同一块硅胶G 板上,以三氯甲烷-甲醇-水(15:7:2)的下层溶液为展开剂,在8℃、25℃、32℃的温度下展开,拿出,自然晾干,再喷适量10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色,置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图3。结果表明,展开温度对分离结果影响不大,可选择在室温下展开。
图3 温度考察
(3)不同展开湿度的考察。分别吸取理冲颗粒溶液、黄芪甲苷对照品溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL,分别点于同一块硅胶G 板上,以三氯甲烷-甲醇-水(15:7:2)的下层溶液为展开剂,在相对湿度为32%、58%、88%的湿度下展开,拿出,自然晾干,再喷适量10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色,置于365 nm紫外光灯下检视。结果见图4。结果表明,不同的相对湿度对展开结果影响不大。
图4 湿度考察
2.2.1 理冲颗粒溶液和三棱对照药材溶液的制备
取理冲颗粒10g,加乙醇50mL,加热回流1h,过滤,蒸干滤液,残渣用2mL 乙醇溶解,制成理冲颗粒溶液。另取三棱对照药材2g,用相同方法制成三棱对照药材溶液。
2.2.2 理冲颗粒阴性溶液的制备
取不含三棱的理冲颗粒10g,按“2.2.1” 流程制成理冲颗粒阴性溶液。
2.2.3 展开系统的考察
分别吸取理冲溶液、三棱对照药材溶液和理冲颗粒阴性溶液各1~5μL,分别点于同一块硅胶G 薄层板上,以环己烷-丙酮(9.2:0.8)为展开系统Ⅰ,环己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开系统Ⅱ,石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(4:1)为展开系统Ⅲ,展开,拿出,自然晾干,置于365 nm紫外光灯下检视。结果见图5。结果表明,展开系统Ⅲ的展开效果最佳,理冲颗粒阴性溶液色谱在相应位置上无干扰。因此石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(4:1)为该薄层鉴别的展开系统。
图5 展开系统考察
2.2.4 耐用性考察[5]
(1)不同薄层板的考察。分别吸取理冲溶液、三棱对照药材溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL,分别点于3 种不同的硅胶G 板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(4:1)为展开剂,拿出,自然晾干,置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图6。结果表明,不同材料的薄层板对展开效果影响不大。
图6 薄层板考察
(2)不同展开温度的考察。分别吸取理冲溶液、三棱对照药材溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL,分别点于同一硅胶G 板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(4:1)为展开剂,在8℃、25℃、32℃的温度下展开,拿出,自然晾干,置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图7。结果表明,展开温度对分离结果影响不大,选择在室温下展开。
图7 温度考察
(3)不同展开湿度的考察。分别吸取理冲溶液、三棱对照药材溶液和理冲颗粒阴性溶液各5μL,分别点于同一硅胶G 板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(4:1)为展开剂,在相对湿度为32%、58%、88%的湿度下展开,拿出,自然晾干,置于365 nm 紫外光灯下检视。结果见图8。结果表明,不同的相对湿度对展开结果影响不大。
图8 湿度考察
以上黄芪甲苷和三棱的薄层色谱结果可说明,本次实验建立的理冲颗粒的薄层色谱鉴别方法分离效果佳,结果可重现,能用于理冲颗粒的鉴别并为理冲颗粒的质量控制提供参考依据。
实验研究中,拟对党参、白术、山药、天花粉进行薄层鉴别,但由于以上四味成分均具有氨基酸成分,阴性样品存在互相干扰情况,因此未再进行深入研究。
实验考察了不同材质的薄层板、温度、湿度对理冲颗粒分离程度的影响,结果表明,供试品在不同环境下的分离程度佳,斑点清晰可见。另对黄芪甲苷对照品溶液、三棱对照药材、理冲颗粒溶液及其阴性溶液的稳定性进行了考察,结果表明,以上溶液在放置96 小时后点样,层析结果和之前一样,由此可见样品稳定性较好。
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