武亚芬 向丹 梁斌 李琳 黄玉丹 朱晓雪 徐良
摘要:为筛选获得针对番茄枯萎病的生防菌,从山东寿光设施大棚内番茄根际筛选获得1株细菌菌株KCKB1,通过菌落形态特征观察以及16S rRNA基因序列分析,菌株KCKB1确认为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其开展对峙培养、种属鉴定、生长特性研究、抑菌谱检测以及盆栽防效验证。结果表明,菌株KCKB1能有效抑制番茄枯萎病,盆栽防治效果达到61.46%;
菌株KCKB1可以提高番茄植株叶片内抗氧化酶(SOD、CAT)以及抑菌物质合成酶(PAL、PPO)的活性,进而提高植株抗病性。同时,菌株KCKB1还具有溶磷、固氮、产铁载体、产ACC脱氨酶、产IAA等促生功能,能明显促进番茄植株的生长。此外,菌株KCKB1对链格孢菌、甘薯长喙壳菌、灰葡萄孢、烟草疫霉菌、尖孢镰刀菌甘薯专化型5种病原菌均具有良好的的抑菌效果。综上,枯草芽孢杆菌菌株KCKB1具有良好的生防潜力与广阔的应用前景,为对番茄枯萎病进行生物防治提供了菌种资源。
关键词:枯草芽孢杆菌;
番茄枯萎病;
生物防治;
促生长特性
中图分类号:S436.412.1 文献标志码:A 文章编号:1002-1302(2023)09-0131-09
基金项目:山东省重大科技创新工程项目(编号:2021CXGC010801);
青岛市科技惠民示范引导专项(编号:21-1-4-ny-13-nsh)。
作者简介:武亚芬(1998—),女,山东泰安人,硕士研究生,从事根际功能微生物对番茄枯萎病抗病研究。E-mail:3494511371@qq.com。
通信作者:徐 良,博士,副教授,从事植物修复与资源化研究。E-mail:
xuliang@qau.edu.cn。
山东省寿光市是全国著名的菜都,番茄的种植面积占蔬菜总种植面积的1/4左右[1]。但由于近年来番茄的栽培面积不断扩大且连续栽培年限不断加长,使寿光设施栽培条件下种植的番茄受到很多土传植物病害的危害,其中对番茄影响很大的病害之一为番茄枯萎病。番茄枯萎病是一种维管束疾病,导致这种病害产生的病原菌是尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici,Fol),番茄的整个生育期都有可能被该病原菌侵染[2],严重时可造成番茄减产65%以上甚至绝收[3]。目前,对番茄枯萎病的防治措施有喷施化学药剂[4],还有以选育抗病品种和改善栽培模式为主的农业防治[5],以改良土壤理化性质、改善土壤pH值等为主的物理防治[6]。目前喷施化学药剂仍然是防治番茄枯萎病的主要手段[7]。但长期大量施用化学农药会带来植株表面残留药剂、使病原菌产生耐药性、污染耕作土壤等危害人体及生态环境的问题[8]。因此,迫切需要开发绿色无污染、高效可持续、环境友好型的防治产品[9]。
利用生防菌防治植物病害能减小化学药剂对环境的干扰,更为绿色安全,目前已经成为研究热点[10]。生防菌通过分泌抑菌物质、诱导植物产生系统抗病性与病原菌竞争生存资源等途径来实现对病原菌的抑制[11]。已报道的番茄枯萎病生防菌主要有Bacillus sp.、Trichoderma sp.等[12]。张亮等利用荧光假单胞菌PEF-5#18防治番茄枯萎病,发现菌株能明显降低番茄枯萎病发病率,增加植株生物量[13];
张萧萧等获得一株ARTP突变枯草芽孢杆菌YJY19-01,发现该菌株对番茄枯萎病菌抑制作用明显[14];
郝晓娟等使用铜绿假单胞菌对番茄枯萎病进行防治试验,结果表明,FJAT-36菌株能明显抑制番茄枯萎病病原菌的生长,并对番茄植株有促生作用[15];
钱晓雍等发现,3株对番茄枯萎病有优良防治效果的非致病镰刀菌菌株,以施用浓度为 105 CFU/g IF23菌株的防治效果最好[16]。尽管现在已经有多种对番茄枯萎病有防治效果的生防菌被开发出来,但是由于生防菌株根际定殖能力不稳定、具有生物防治能力的菌株与被引入地区土壤中的土著微生物的生存会相互影响,导致生防菌株对病害的田间防治效果不稳定、有地域适应性及差异性等问题[17]。这就迫切需要开发生防菌被引入地特有的、与当地生态环境相匹配的拮抗菌,用于本土番茄枯萎病的防治。
为进一步开发适合于山东省本土番茄枯萎病的生防菌资源,本研究从山东省设施大棚内,利用梯度稀释平板涂布法以及平板对峙法筛选番茄枯萎病土著生防细菌,并通过细菌的生长状态和特点以及16SrRNA基因序列分析确定其分类地位,对菌株生长特性以及促生功能进行检测,并利用室内盆栽试验验证菌株的防效。旨在为山东省寿光市的本土番茄枯萎病的生物防治提供理论支持,同时开发稳定的番茄枯萎病生防菌株。
1 材料与方法
1.1 供试材料
1.1.1 供试菌株 番茄枯萎病:病原为尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici),由笔者所在课题组从山东省寿光市设施大棚内分离保存;
番茄灰霉病:病原为灰葡萄孢(B. cinerea),由青岛农业大学植物医学学院提供;
甘薯黑斑病:病原为甘薯长喙壳菌(Ceratocystis fimbriata Ellis et Halsted),由中国农业科学院甘薯研究所提供;
甘薯蔓割病:病原为尖孢镰刀菌甘薯专化型(F. oxysporum f. sp. batatas),由福建省农業科学院作物研究所提供;
烟草赤星病:病原为链格孢菌(Alternaria alternata),烟草黑胫病:病原为烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var. nicotianae),由中国农业科学院烟草研究所生物技术研究中心提供。
1.1.2 供试培养基 LB培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、燕麦培养基用于抑菌谱的测定[18],Ashby无氮培养基[19],PKO无机磷培养基[20],蒙金娜有机磷培养基[21],CAS培养基[22],DF盐培养基[23],钾细菌筛选培养基用于菌株功能检测[24]。
1.1.3 供试番茄品种 草莓番茄购于山东寿禾种业有限公司。
1.2 拮抗菌株的分离、纯化及保存
采集山东省寿光市设施大棚番茄根际土壤样品,每份样品称取10 g,加入90 mL无菌水中,恒温振荡培养15 min(30 ℃,180 r/min)。利用倍比稀释法稀释土壤样品,稀释至浓度为10-6,将10-4、10-5、10-6等3个浓度的土壤稀释样品涂布于LB培养基上,稀释液涂布用量为100 μL,每个浓度涂布3个平板,在恒温培养箱中培养24 h,平板倒置,培养温度为30 ℃。将不同类型的单菌落接种至LB培养基平板上进行纯化培养,纯化3次后,用30%甘油将菌株保存在菌种保藏管中,并放入-80 ℃冰箱,以备下一步筛选。
1.3 拮抗细菌的筛选
1.3.1 供试菌株的培养 用PDA培养基以及燕麦培养基活化培养上述6种不同的病原菌,分离出的不同细菌菌株用LB液体培养基活化培养,使不同供试细菌最终浓度统一为1×107 CFU/mL,进行番茄枯萎病生防菌株的筛选。
1.3.2 拮抗菌的筛选 采用平板对峙培养法[25]。在PDA固体培养基平板中央接种长势均匀的直径为0.5 cm的菌饼,在距病原菌菌饼2.5 cm的对称4点处,分别接种不同的供试细菌菌株,以只接种病原菌的平板作为对照,培养7 d,挑取具有抑菌效果的菌株进行复筛。将致病菌菌饼接种于PDA培养基平板的正中间,在距病原菌菌饼2.5 cm的对称4点处,接种初筛获得的拮抗菌菌株,每个菌株3个重复,以PDA培养基上只接种病原菌作为对照,在温度为28 ℃的恒温条件下,倒置培养7 d,用十字交叉法测量对照组致病菌的直径(D)、处理组致病菌菌落直径(d)以及抑菌带宽度,计算抑菌率。
抑菌率=(D-d)/D×100%;
抑菌带宽度:细菌菌落边缘和病原菌菌丝边缘之间的距离。
1.4 拮抗菌株KCKB1的鉴定
1.4.1 菌株形态 采用3区划线法,将菌株KCKB1接种至LB培养基中,置于30 ℃培养24~48 h,观察其菌落颜色和生长状态及特点;
之后对菌株KCKB1进行革兰氏染色,方法参考《常见细菌鉴定手册》[26]、《伯杰细菌鉴定手册》[27]。
1.4.2 菌株KCKB1多基因系统发育树构建 KCKB1菌株16S rRNA基因片段的扩增使用细菌通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3′)和1492R(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′)进行。PCR反应体系参考细菌菌种鉴定PCR试剂盒(B532063-0050)说明书。引物合成和基因测序均由上海派森诺生物科技有限公司完成。利用菌株KCKB1的16S rRNA序列及在NCBI网站下载的相关参考菌株的基因序列,用MEGA 7.0构建系统发育树。
1.5 菌株KCKB1抑菌作用測定
采用对峙培养法对KCKB1菌株的抑菌作用进行检测,选用甘薯黑斑病、甘薯蔓割病、烟草赤星病、烟草黑胫病、番茄灰霉病进行抑菌作用测定,具体操作步骤同“1.3.2”节。
1.6 菌株KCKB1生长速率测定
将在LB培养基上划线培养好的KCKB1菌株接种于LB液体培养基中,30 ℃、180 r/min恒温振荡培养,每隔2 h取样1次,测定600 nm波长下菌液的吸光度(D600 nm),以取样时间为横轴,吸光度(D600 nm)为纵轴,绘制生长曲线。
1.7 菌株生物学特性测定
温度对KCKB1菌株生长的影响:在LB液体培养基中接种培养好的KCKB1菌株,分别在22、25、28、31、34、37、40、43 ℃,180 r/min条件下振荡培养,培养24 h时,测定D600 nm,以培养温度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制曲线图。
pH值对KCKB1菌株生长的影响:在LB液体培养基中接种培养好的KCKB1菌株,分别在pH值为4、5、6、7、8、9、10、11、12,30 ℃,180 r/min条件下振荡培养,培养24 h时,测定菌液D600 nm,以pH值为横坐标,D600 nm为纵坐标,绘制曲线图。
NaCl浓度对KCKB1菌株生长的影响:在LB液体培养基中接种培养好的KCKB1菌株,LB液体培养基的NaCl浓度分别为0、5、10、25、50、100 g/L,30 ℃,180 r/min条件下振荡培养,培养24 h时,测定D600 nm,以NaCl浓度为横坐标,D600 nm为纵坐标绘制曲线图。
1.8 菌株KCKB1的促生长活性检测。
1.8.1 菌株溶磷能力检测[15-16] 在无机磷培养基、蒙金娜有机磷培养基中分别接种KCKB1菌株,30 ℃培养箱中倒置培养5~7 d,观察菌落周围有无透明圈产生,若有,对其直径(D)和菌落直径(d)进行测量,通过二者比值(D/d)大小判断KCKB1菌株的溶磷能力。
1.8.2 菌株解钾能力检测[19] 将菌株KCKB1接种至钾细菌筛选培养基上,于30 ℃培养5~7 d,若有,对其直径(D)和菌落直径(d)进行测量,通过二者比值(D/d)测量透明圈直径和菌落直径的比值(D/d),比值代表菌株KCKB1的解钾能力。
1.8.3 菌株固氮能力的检测[14] 将菌株KCKB1接种于Ashby无氮培养基上,以接种在LB培养基上为对照,若KCKB1菌株能在Ashby无氮培养基上正常生长,则菌株具有固氮能力。
1.8.4 菌株分泌铁载体能力的检测 参考荣良燕等的方法[28],采用CAS平板检测法,对KCKB1菌株是否具有分泌铁载体的能力进行检验。KCKB1菌株划线接种在LB 培养基平板上,培养 24 h 后,在CAS固体检测平板上接种KCKB1菌株,接种所用的工具为无菌牙签。放于30 ℃培养箱中倒置培养5~7 d。设置3个重复,观察菌落周围是否会产生黄色或橙色晕圈,即噬铁圈,并测定晕圈的直径(D)与菌落的直径(d)即为噬铁指数,表示噬铁能力的大小。
1.8.5 菌株分泌IAA能力的检测 产生长激素(IAA)能力检测参考Glick等的方法[29]。将活化后的菌株接种到含 5 mmol/L 色氨酸的LB液体培养基中,在30 ℃,180 r/min 条件下摇床培养48 h,取2 mL培养液,以10 000 r/min的速度离心15 min,每1 mL上清液加2 mL Salkowski试剂(10.8 mol/L H2SO4含 4.5 g FeCl3),室温暗处显色30 min后,于530 nm处测吸光度。以空白培养基作对照,并以纯IAA对应的吸光度作标准曲线,计算IAA产量(μg/mL)。
1.8.6 菌株ACC脱氨酶活性检测 参考Glick的方法,在5 mL无氮液体培养基中接种KCKB1菌株,30 ℃、180 r/min振荡培养1 d[29];
吸取上述培养液0.1 mL并在5 mL DF培养基中接种,之后振荡培养1 d;
将上述培养液0.1 mL接种至5 mL ADF培养基中振荡2 d;
重复转接、培养能够在ADF培养基中正常生长的菌株,能够仅靠氨基环丙烷羧酸提供的氮源生长的菌株为ACC(1-氨基环丙基-1-羧酸)脱氨酶阳性菌株。
1.9 菌株KCKB1对番茄枯萎病盆栽防效测定
1.9.1 试验概况 试验于2019年在青岛农业大学人工气候室进行。采用灌根法接种拮抗菌以及病原菌进行盆栽试验。利用马铃薯葡萄糖液体培养基培养番茄枯萎病病原菌,于28 ℃、以180 r/min的速度恒温振荡培养2 d后,过滤、弃滤渣收集滤液备用(1×106个/mL);
将KCKB1菌株接种于液体LB培养基中,30 ℃、180 r/min 摇床振荡培养24 h后收集菌液(1×107 CFU/mL)备用。挑选长势一致的2叶1心健康番茄幼苗,移栽至花盆中(直径10.0 cm,高 8.3 cm),每盆1株。共设置4个处理:CK(清水对照);
KW(只接种番茄枯萎病病原菌);
KCKB1(只接种拮抗菌株KCKB1);
KW+KCKB1(拮抗菌菌株KCKB1和病原菌同时存在)每个处理30盆。移栽后定植3 d,用灌根法接种菌株KCKB1菌液50 mL,接种3 d后同样以灌根法接种病原菌孢子悬液 30 mL。接种病原菌30 d观察番茄植株感染番茄枯萎病的情况。
1.9.2 盆栽防效评价指标 统计病情指数、发病率、菌株KCKB1的生物防治效果以及番茄植株叶片内抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)[30]、过氧化氢酶(CAT)[31]、过氧化物酶(POD)[32]]和抑菌物质合成酶[多酚氧化酶(PPO)[33]、苯丙氨酸解氨酶(PAL)[34]]5种防御酶活性。
番茄枯萎病病情分级标准参考周东兴等统计番茄枯萎病病情指数的标准[35]:
病情指数=∑(不同级别病情的植株数×病情代表级数)/(病情调查植株的总数×最高代表级数);
发病率=发病植株数/调查总植株数×100%;
防治效果=(对照病情指数-调查处理病情指数)/对照病情指数×100%。
1.10 数据分析
试验数据采用SPSS 20.0进行单因素方差分析,用LSD法进行显著性差异检验,用MEGA 7.0采用邻接法(NJ)构建系统发育树。
2 结果与分析
2.1 拮抗菌的分离与筛选
从寿光设施大棚土壤中共分离纯化获得31株细菌,经过初筛获得8株具有抑菌效果的菌株。复筛结果表明:KCKB1菌株的抑菌效果最好(表1、圖1),抑菌率为75.10%,高于其他菌株,因此选用此菌株进行后续试验。
2.2 番茄枯萎病拮抗菌株KCKB1的鉴定
2.2.1 菌株KCKB1形态学特征 在LB固体培养基上接种KCKB1菌株,培养1 d之后观察菌株KCKB1菌落的生长状态及特点。菌落的颜色为不透明的污白色,形状不规则,菌落表面不光滑、不平整,杆状菌体,菌株KCKB1为革兰氏阳性菌(图2)。
2.2.2 分子生物学鉴定 以KCKB1菌株的基因组DNA为模板,使用16S rRNA 通用基因引物进行PCR扩增并测序,得到1 469 bp的序列,在GenBank数据库中提交并比对所得基因序列,结果显示,该菌为芽孢杆菌属细菌,其与B. subtilis KC142124有99%的同源性基因序列,系统发育树(图3)显示,与菌株KCKB1同一分支的为枯草芽孢杆菌属。因此依据16S rRNA基因序列的分析结果,结合菌株的形态学特征,将其判定为枯草芽孢杆菌(B. subtilis)。
2.3 菌株KCKB1对病原菌的抑菌作用测定
菌株KCKB1不仅对番茄枯萎病病原菌有很好的抑菌效果,还对另外 5种病原菌都具有良好的抑菌效果,抑菌率均高于60%,其中对烟草赤星病的抑菌效果最好,抑菌率达到74.89%(表2、图4)。
2.4 菌株生长特性研究
利用LB液体培养基培养菌株KCKB1,在生长的0~6 h处于平缓期,9~30 h处于对数生长期,30 h 以后开始生长缓慢,直到40 h都处于稳定期,40 h以后开始进入衰亡期。37 ℃为KCKB1菌株最适宜生长的温度,最适和KCKB1菌株生长的pH值为pH值=7、氯化钠浓度为10 g/L(图5)。
2.5 番茄枯萎病拮抗菌KCKB1的促生长特性
对菌株KCKB1溶解有机磷及无机磷、解钾、固氮、分泌铁载体、IAA、ACC脱氨酶能力进行检测,评价它的促生长特性,结果(表3、图6)表明,菌株KCKB1具有溶解无机磷、固氮、分泌铁载体、生长素(IAA)以及ACC脱氨酶的能力,其中溶解无机磷的能力较强(溶磷指数达到2.88),但是其产IAA的能力较弱(1.57 μg/mL)。
2.6 菌株KCKB1对番茄枯萎病的盆栽防效以及对番茄生长的影响
2.6.1 菌株KCKB1对番茄枯萎病的盆栽防治效果 在温室盆栽条件下,检测菌株KCKB1对番茄枯萎病防效,结果(表4)表明,接种菌株KCKB1后能够显著降低番茄枯萎病的病情指数以及发病率,菌株KCKB1对于番茄枯萎病具有一定的防治效果,防效为61.46%。此外,番茄植株受到番茄枯萎病胁迫下,番茄植株体内的SOD、CAT、POD、PPO以及PAL活性分别是清水对照的3.54、1.05、3.21、1.68、1.19倍,接种菌株KCKB1后,番茄体内SOD、CAT、POD、PPO、PAL活性较枯萎病处理分别提高18.91%、45.26%、18.11%、14.81%、4.42%(表5)。结果表明,番茄枯萎病可以诱导番茄植株体内的抗逆酶活性提高,加入菌株KCKB1可以进一步诱导番茄植株体内抗逆酶活性提高,增强植株的抗病性。
2.6.2 菌株KCKB1对番茄植株生长状况的影响 为评价菌株KCKB1对番茄生长的影响,分别测定番茄植株的株高、茎粗、地上部生物量、地下部生物量。试验结果表明,在正常生长条件下,菌株KCKB1处理后番茄植株的茎粗、地下鲜质量、地上干质量、地下干质量分别增加36.05%、138.20%、9.21%、29.41%;
在有番茄枯萎病胁迫下,KCKB1菌株处理后,番茄植株的茎粗和地下鲜质量、地下干质量分别增加29.42%、79.78%、36.96%。以上结果表明,菌株KCKB1对番茄植株有明显的促生作用,主要表现在促进番茄植株根系生长方面(表6)。
3 结论与讨论
生防菌的使用存在防效地域差异性的问题[36]。此外,外源生防菌株是否能适应被引入地的环境,成功定殖、增殖是生防菌株发挥生防效果的关键,这也是制约生防菌大范围推广使用的重要因素[37]。因此,筛选适合当地生态环境的土著生防菌株就变得尤为重要。本研究从山东省寿光市设施大棚番茄根际,筛选获得番茄枯萎病生防菌株KCKB1,经菌株KCKB1的生长状态和特点观察以及16S rRNA基因序列分析,KCKB1菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株可以显著降低番茄植株枯萎病病情指数以及发病率,盆栽防效为61.46%,这是对利用山东寿光土著生防菌防治设施番茄枯萎病的首次报道。已有研究表明,山东寿光设施番茄土壤,随着使用年限的增加,已出现明显的酸化与盐渍化现象[38],而本研究筛选获得的菌株KCKB1具有较强的耐酸碱和耐盐能力(适宜生长的pH值范围为4~10,可以在盐浓度为10 g/L的环境中生长),能够适应山东寿光设施番茄生长的条件。
番茄枯萎病病菌生长和侵染番茄的温度为5~35 ℃,在25~28 ℃时发病最为严重[39-40]。本研究筛选获得的菌株KCKB1适宜生长的温度范围为 22~40 ℃,这与番茄枯萎病的发病温度一致,适用于番茄枯萎病的防治。此外菌株KCKB1除了对番茄枯萎病有较好的拮抗作用外,还对番茄灰霉病、甘薯黑斑病、甘薯蔓割病、烟草黑胫病、烟草赤星病均具有较好的抑菌效果。其中,对烟草赤星病的抑菌率最高,达到74.89%;
对甘薯黑斑病和甘薯蔓割病的抑菌率分别达到67.93%和67.17%,本研究也是首次发现枯草芽孢杆菌对这2种病原菌有较好的抑菌效果。这为后续利用生物手段防治这些病原菌引起的病害提供了较好的菌种资源。
诱导植株产生系统抗性(ISR)是生防菌防治植物病害的机制之一,其中诱导系统抗性产生的重要机制包括与抗病反应相关的防御酶活性提高[41]。植物体内与抵抗病原菌侵染有关的重要的防御酶有SOD、CAT、PAL、PPO、POD[42]。本研究中,番茄植株受到枯萎病侵染后,植株体内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶的活性均较清水对照处理有所提高;
使用菌株KCKB1处理后,番茄植株体内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶、过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶活性进一步提高,分别较单接病原菌处理的植株提高了18.91%、45.26%、18.11%、14.81%、4.42%,以上結果表明菌株KCKB1可以诱导番茄植株防御酶活性增高,增强植株的抗病能力。因此,诱导系统产生抗病性可能是菌株KCKB1抑制番茄枯萎病的重要机制。此外,一些土壤微生物具有溶解土壤中难以被植株直接利用的磷、钾、产生铁载体以及固氮的能力[43];
可以产生ACC脱氨酶[44]抑制乙烯的合成和排放,有利于减缓植株衰老;
还可以产生IAA,促进植株生长,这些促生特性也是拮抗菌的生防机制之一[45]。在本研究中,无论是否接种番茄枯萎病,菌株KCKB1均表现出了明显的促生作用,这可能与菌株KCKB1具有较高的溶磷(溶解无机磷指数可达2.88)、固氮、分泌铁载体、生长素以及ACC脱氨酶的能力紧密相关。
综上所述,枯草芽孢杆菌KCKB1可以诱导番茄植株防御酶活性提高,能明显改善番茄枯萎病的发病情况,降低病情指数和发病率,对番茄枯萎病有较好的抑制效果,还具有较广的抑菌谱,同时还具有溶解有机磷及无机磷、固氮、分泌嗜铁素、ACC脱氨酶以及生长素等促生特性,对番茄植株生长有明显的促进作用,表现出了良好的生防潜力,应用前景非常广阔。
从番茄根际筛选获得1株番茄枯萎病拮抗菌KCKB1,经鉴定,菌株为Bacillus subtilis,菌株最适宜生长条件为温度37 ℃,pH值7,盐分浓度10 g/L。菌株KCKB1能有效抑制番茄枯萎病,显著降低番茄枯萎病发病率和病情指数,盆栽防治效果为61.46%;
菌株KCKB1可以提高番茄植株叶片内SOD、CAT、PAL以及PPO的活性,进而提高植株抗病性。同时,菌株KCKB1还具有溶解有机磷和无机磷、固氮、分泌铁载体、ACC脱氨酶、生长素等促生功能,能明显促进番茄植株的生长。此外,菌株KCKB1具有广谱抑菌作用,除了尖孢镰刀菌番茄专化型,菌株KCKB1还对灰葡萄孢、甘薯长喙壳菌、尖孢镰刀菌甘薯专化型、链格孢菌和烟草疫霉菌5种病原菌具有良好的的抑菌效果,其中对烟草赤星病的抑菌率最高,达到74.89%。
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